HPLC-DAD-Analyse

Wofür wird HPLC-DAD verwendet?

Die HPLC-DAD wird zur Bewertung der chemischen Reinheit und Kontamination eingesetzt, was sie in Forschung und Industrie nützlich macht. In der Lebensmittelindustrie wird die HPLC-DAD verwendet, um Produkte auf bestimmte Konservierungsstoffe, Zusatzstoffe und Kontaminanten wie Benzoesäure und Aflatoxine zu testen, was für die Gewährleistung der Verbrauchersicherheit und optimalen Produktqualität unerlässlich ist. Die Technik ist auch gängig in der pharmazeutischen Industrie und der Nahrungsergänzungsmittelindustrie als Qualitätskontrolle, da sie eine präzise Quantifizierung von Wirkstoffen, Vitaminen und Verunreinigungen ermöglicht.

Wie funktioniert HPLC-DAD?

HPLC funktioniert, indem die Probe durch eine Chromatographiesäule geleitet wird. Dies führt dazu, dass sich einzelne Komponenten innerhalb der Probe aufgrund ihrer chemischen und physikalischen Eigenschaften trennen. Jede Komponente wird dann einzeln am Ende der Säule eluiert, wo ein Detektor wie DAD sie analysieren kann.

Der Diodenarray-Detektor scannt die Proben mit einem Lichtstrahl, der über das gesamte ultraviolette und sichtbare Lichtspektrum variiert. Er misst die Menge der einzelnen Wellenlängen des absorbierten Lichts im Verhältnis zur Zeit, in der die einzelnen chemischen Spezies aus der Säule eluiert wurden. Zusammen helfen diese Spektral- und Retentionsdaten dabei, die verschiedenen Komponenten innerhalb der Probe und ihre Mengen zu identifizieren.

Probenanforderungen und -vorbereitung

Die HPLC wird in der flüssigen Phase durchgeführt, was bedeutet, dass feste Proben vor dem Testen in einem geeigneten Lösungsmittel gelöst werden müssen. Das Vorhandensein selbst einer geringen Anzahl fester Partikel kann zu Verstopfungen in der Säule führen. Lösungsmittel (einschließlich Wasser) müssen von hoher Reinheit sein, um Kontaminationen und mögliche Auswirkungen auf die Ergebnisse zu minimieren. Flüssigkeiten können getestet werden, jedoch sind möglicherweise serielle Verdünnungen erforderlich, um klarere Ergebnisse zu erzielen.

DAD- vs. UV-VIS-Detektor

DAD- und UV-Vis-Detektoren arbeiten beide nach dem gleichen Prinzip der Messung der von einer Probe absorbierten Lichtmenge. Der Unterschied besteht darin, dass der UV-Vis-Detektor so eingerichtet ist, dass er zu einem bestimmten Zeitpunkt spezifische Teile des Spektrums misst, während der DAD das gesamte Spektrum auf einmal messen kann. Dies macht die DAD-Methode für die meisten Anwendungen effizienter und praktischer als die konventionelle UV-Vis-Detektion. Die HPLC-UV-Methode kann jedoch nützlich sein, wenn eine spezifische Substanz quantifiziert werden soll, wie beispielsweise Benzoesäure oder Sorbinsäure.

HPLC-DAD vs. LC-MS

Die Flüssigchromatographie-Massenspektrometrie (LC-MS oder HPLC-MS) ist eine ähnliche Technik, die mit Flüssigchromatographie beginnt. Der Unterschied besteht darin, dass die getrennte Probe anschließend durch ein Massenspektrometer geleitet wird, wo sie ionisiert, weiter getrennt und basierend auf dem Masse-zu-Ladung-Verhältnis jedes Ions detektiert wird. Dies macht die LC-MS zu einer empfindlicheren Technik, die in der Lage ist, kleinere Mengen der einzelnen Komponenten nachzuweisen.

HPLC-DAD funktioniert im Allgemeinen am besten, wenn der Anwender bereits ein gewisses Verständnis über den Inhalt der Lösung hat, während LC-MS zur Charakterisierung einer völlig unbekannten Probe verwendet werden kann. LC-MS kann jedoch mehr Schulung erfordern und schwieriger zu interpretieren sein, weshalb HPLC-DAD oft als unkompliziertere Detektionsmethode gewählt wird.

Darüber hinaus unterscheiden sich die vom DAD-Detektor erfassten Daten von denen der Massenspektrometrie und können dazu beitragen, Verbindungen zu trennen, die in der MS maskiert würden, wie beispielsweise solche mit sehr ähnlichen chemischen Massen. Daher bieten beide Techniken unterschiedliche Einblicke und können in Kombination für eine umfassendere Analyse eingesetzt werden.

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