HPLC-FLD-Analyse

Wofür wird HPLC-FLD verwendet?

Die HPLC-FLD wird verwendet, um bestimmte (in der Regel organische) Substanzen mit fluoreszierenden Eigenschaften nachzuweisen und zu quantifizieren. Typische Zielanalyten sind Vitamine und Hormone wie Melatonin. Sie können in Spurenmengen nachgewiesen und mit Genauigkeit und Präzision quantifiziert werden. Daher liegen die Anwendungsmöglichkeite der HPLC-FLD in der Qualitätssicherung von Arzneimitteln, Nahrungsergänzungsmitteln und anderen Produkten, die exakte Mengen dieser Substanzen enthalten müssen.

Bestimmte Kontaminanten wie Bisphenol A (BPA), polyzyklische aromatische Kohlenwasserstoffe (PAK) und Aflatoxine weisen ebenfalls fluoreszierende Eigenschaften auf und können daher mittels HPLC-FLD nachgewiesen werden. Dies ermöglicht Anwendungen der Methode beim Kontaminanten-Screening von Lebensmitteln, Wasser, Lebensmittelkontaktmaterialien und anderen Materialien, in denen diese Kontaminanten bestimmte Grenzwerte nicht überschreiten dürfen (z. B. die in den EU-BPA-Verordnungen festgelegten Grenzwerte). Umweltproben können ebenfalls analysiert werden, um Verschmutzungsgrade zu überwachen.

Wie funktioniert der Fluoreszenzdetektor?

Bei einem Fluoreszenzdetektor wird die Probe einem Strahl aus einer hochenergetischen Lichtquelle ausgesetzt. Je nach Wellenlänge des Lichts führt dies dazu, dass bestimmte Verbindungen in der Probe „fluoreszieren“ und selbst Licht mit einer anderen Wellenlänge erzeugen. Der Detektor überwacht diese Emissionen und sammelt Daten zu den spezifischen Wellenlängen und Intensitäten, wodurch sich die Konzentrationen der verschiedenen Verbindungen in der Probe ermitteln lassen. In Kombination mit der durch HPLC bewirkten Trennung ist es möglich, eine Probe, die fluoreszierende Chemikalien enthält, genau zu charakterisieren.

HPLC FLD vs. DAD

Die Diodenarraydetektion (DAD) ist eine alternative Detektionsmethode zur FLD bei der HPLC-Analyse. Im Gegensatz zur FLD setzt die DAD die Probe einem breiten Lichtspektrum aus und misst, welche Wellenlängen von der Probe absorbiert werden, anstatt welche Wellenlängen durch Fluoreszenz erzeugt werden. Der Hauptvorteil besteht darin, dass sie für ein wesentlich breiteres Spektrum an Molekülen eingesetzt werden kann, während die FLD nur für Moleküle mit natürlichen Fluoreszenzeigenschaften geeignet ist.

FLD bietet jedoch eine weitaus empfindlichere Nachweismethode, sodass in Fällen, in denen sie anwendbar ist, geringere Mengen spezifischer Verbindungen nachgewiesen werden können. Daher hängt die geeignete Nachweismethode von den Eigenschaften der Zielanalyten ab.

Andere Flüssigchromatographie-Methoden können ebenfalls in Betracht gezogen werden. Beispielsweise kann UPLC-MS/MS (Ultrahochleistungsflüssigchromatographie-Tandem-Massenspektrometrie) für eine größere Bandbreite von Analyten als HPLC-FLD eingesetzt werden und ist dabei äußerst genau und präzise.

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